PCR實(shí)驗室與普通實(shí)驗室不同，它的建設要求更高。因此對于PCR實(shí)驗室建設來(lái)講,要注意的點(diǎn)有很多。博泰小編帶大家了解PCR實(shí)驗室建設都要注意哪些問(wèn)題。

一、設計要點(diǎn)

PCR實(shí)驗室可以是分散形式，也可以是組合形式。完成一組PCR實(shí)驗，通常應經(jīng)過(guò)試劑配制、樣品處理、核酸擴增及產(chǎn)物分析四個(gè)實(shí)驗過(guò)程，若實(shí)驗工藝需要，還應增加樣品粉碎過(guò)程。

1、分散形式PCR實(shí)驗室：

所謂分散形式PCR實(shí)驗室，是指完成上述實(shí)驗過(guò)程的實(shí)驗用房彼此相距較遠，呈分散布置形式。對于這種布置形式的PCR實(shí)驗室，由于各個(gè)實(shí)驗之間不易相互干擾，因此無(wú)需特殊條件要求。

2、組合形式PCR實(shí)驗室：

所謂組合形式PCR實(shí)驗室, 是指完成PCR四個(gè)實(shí)驗過(guò)程的實(shí)驗用房相鄰布置，組成獨立實(shí)驗區域的形式。對于組合形式PCR實(shí)驗室，由于各個(gè)實(shí)驗間集中布置，容易造成相互干擾，因此，對總體布局以及屏障系統具有一定的要求。各室在入口處設緩沖間，以減少室內外空氣交換。

二、建設要點(diǎn)

1、試劑配制室及樣品處理室宜呈微正壓，以防外界含核酸氣溶膠的空氣進(jìn)入，造成污染；可以通過(guò)控制進(jìn)風(fēng)風(fēng)量大于排風(fēng)風(fēng)量達到正壓效果。

2、核酸擴增室及產(chǎn)物分析室應呈微負壓，以防含核酸的氣溶膠擴散出去污染試劑與樣品，可以通過(guò)控制排風(fēng)風(fēng)量大于進(jìn)風(fēng)風(fēng)量達到負壓效果。

3、在理想情況下，PCR實(shí)驗室緩沖間內，可設置正壓，使室內空氣不流向室外，室外空氣不流向室內。 PCR實(shí)驗室進(jìn)風(fēng)由原有*空調控制，要求將*空調風(fēng)口安裝到定點(diǎn)，且高度為地面鋪裝好后2600mm處。

4、如果使用熒光PCR儀，擴增室和產(chǎn)物分析室可以合并。若房間允許，可設PCR內部走廊。需要指出的是在減少室內外空氣交換方面，緩沖間比走廊更有意義。

5、各個(gè)區域之間應具備單向的實(shí)驗工藝流、物流、人流與氣流，形成單向流程的保護屏障，避免實(shí)驗之間的相互干擾，防止核酸氣溶膠對實(shí)驗過(guò)程造成污染產(chǎn)生假性結果。

6、實(shí)驗室的墻體，包括頂棚，應結構牢固、氣密性好；所有陰角宜采用圓弧形線(xiàn)條過(guò)渡；墻體內壁光潔、不吸附、耐腐蝕、易清洗消毒；地面材料應滿(mǎn)足無(wú)縫隙、無(wú)滲漏、光潔、耐腐蝕的要求。

三、PCR實(shí)驗室主要設備

1、試劑準備區：

儀器設備主要有冰箱、超凈臺、加樣器、混勻器、天平和離心機等，加樣器、天平除了要外，還應有定期校準。試劑分裝應在超凈臺中進(jìn)行，擴增反應混合液應使用分子生物學(xué)級的，試劑制備好后應有質(zhì)檢：一是否有污染、二是檢測試劑的擴增效果。

2、標本制備區：

儀器設備主要有生物安全柜、加樣器、離心機、溫育儀、混勻器等

3、擴增區：

擴增區的主要儀器是核酸擴增儀、超凈臺、微量加樣器、離心機、可移動(dòng)紫外燈。擴增儀需進(jìn)行校準。并配備UPS電源，以防止由于電壓的波動(dòng)，停電對擴增效果的影響。

4、分析區：

本區所使用的儀器設備有酶標儀、洗板機、加樣器和水浴箱等 潔凈實(shí)驗區的緩沖間部分面積不能超過(guò)主實(shí)驗室的八分之一,這是有規定的。

四、不可忽略的問(wèn)題

1、實(shí)驗室空調通風(fēng)系統設計及壓力控制：

PCR實(shí)驗室并沒(méi)有嚴格的凈化要求，但是為避免各個(gè)實(shí)驗區域間交叉污染的可能性，宜采用全送全排的氣流組織形式。同時(shí)，要嚴格控制送、排風(fēng)的比例以保證各實(shí)驗區的壓力要求。

2、污染的預防與控制：

PCR實(shí)驗室設計的核心問(wèn)題是如何避免污染。在實(shí)際工作中，常見(jiàn)的有以下幾種污染類(lèi)型：擴增產(chǎn)物的污染；天然基因組DNA的污染；試劑的污染以及標本間的污染。由于一旦發(fā)生污染，實(shí)驗就必須停止，直到找到污染源為止，而且實(shí)驗結果必須作廢，需重新進(jìn)行實(shí)驗。所以發(fā)生污染后再?lài)@實(shí)驗室來(lái)尋找污染源不但耗時(shí)而且繁瑣，浪費人力物力。因此要避免污染，應該先預防，而不是排除。